Coloración de cápsula.
Las cápsulas son estructuras extracelulares mucilaginosas
que se encuentran alrededor de algunas bacterias. La mayor cantidad de las
cápsulas están conformadas por polisacáridos. De forma frecuente la producción
de cápsula está relacionada con la virulencia de microorganismos causantes de
enfermedad. La pérdida de la capacidad de formar una cápsula debido a una
mutación está asociada con la desaparición de la virulencia y el incremento de
la facilidad de destrucción por parte de los fagocitos, aunque no afecta la
viabilidad. Las cápsulas pueden ser destruidas o disueltas con mucha facilidad,
y son difíciles de colorear. Se usan dos métodos para poder verlas al
microscopio óptico: las coloraciones de Anthony o de Hiss, que emplean cristal
violeta o fucsina básica, para colorear la célula, y una sal de cobre que se
deposita en el exterior de la cápsula. El otro método está basado en la
utilización de una coloración negativa, por medio de la cual, las células
quedan suspendidas en nigrosina o tinta china, que teñirá el medio que las
rodea, pero no a las bacterias, dejándolas incoloras
La coloración de Hiss descrita en el párrafo anterior también
es conocida como método de Welch, la cual es descrita como la tinción de cápsula, incluye el tratamiento de las bacterias con una solución caliente de cristal violeta
el cual es seguido por un lavado con una solución de sulfato de cobre. El
sulfato de cobre es utilizado para lograr la remoción del exceso de
colorante debido a que si es lavado con agua se podría disolver la cápsula. El sulfato
de cobre también agrega color al fondo y da como resultado que la célula y el
fondo aparezcan teñidos en color azul oscuro, mientras que la cápsula aparece
de color azul pálido
La coloración con tinta china no solo es utilizada para
detectar cápsulas en bacterias, también se usa para observar la cápsula en
levaduras como Cryptococcus. Una variante del examen directo es el
método de la tinta china, en el cual la tinta oscurece el trasfondo en vez de
la célula, el pigmento no tiñe la cápsula con lo cual se origina un halo claro
que rodea a la célula de levadura
Coloración de Hiss
Procedimiento
·
Se prepara una suspensión bacteriana en solución
salina fisiológica a partir del microorganismo a investigar (Klebsiella
sp. o Streptococcus pneumoniae, por ejemplo).
·
Realizar un extendido, combinando el contenido
de un asa de la suspensión bacteriana con una gota de suero normal sobre una
lámina portaobjeto.
·
Secar al aire.
·
Fijar por calor.
·
Agregar cristal violeta.
·
Calentar hasta el desprendimiento de vapores por
un minuto.
·
Enjuagar con sulfato de cobre.
·
Escurrir el portaobjetos.
·
Secar al aire en posición vertical.
·
Observar con objetivo de inmersión (100X).
Interpretación
Las cápsulas se verán como un área color violeta claro
rodeando a la célula bacteriana que se tiñe de un color violeta
Colorantes de Hiss
La primera solución se prepara disolviendo un gramo de
cristal violeta en 100 mililitros de agua destilada, se mezcla y se envasa en
frasco ámbar, también se puede utilizar una solución acuosa de fucsina al cero
coma cinco por ciento. La segunda solución (sulfato de cobre al 20%), se
prepara disolviendo 200 gramos de CuSO4 5H2O en 800
mililitros de agua destilada, se debe conservar en frasco ámbar
Coloración de Hiss modificación de Anthony
Procedimiento
·
Realizar un extendido fino sobre un portaobjeto
a partir del microorganismo a estudiar en leche descremada.
·
Secar al aire.
·
Cubrir con cristal violeta al uno por ciento por
dos minutos.
·
Lavar con sulfato de cobre al 20%.
·
Escurrir el portaobjetos.
·
Secar al aire en posición vertical.
·
Observar con objetivo de inmersión (100X).
Interpretación
Las cápsulas se observaran como una zona de color violeta
claro que rodea a las bacterias que se colorean de forma intensa. Si se usa fucsina,
las cápsulas se verán como un halo rosado claro alrededor de las bacterias que
se colorean de color rojo intenso
Colorantes de Anthony
Esta coloración utiliza los mismos colorantes que la técnica
de Hiss.
Coloración negativa o por contraste
La coloración o tinción negativa es lo contrario a una
tinción, las células no se tiñen, pero el medio que las rodea si lo hace. La
sustancia empleada para la coloración negativa es una materia opaca que no
tiene afinidad por los constituyentes celulares y que solamente rodea a las
células, como la tinta china, la cual es una suspensión coloidal de carbono, o
la nigrosina, un colorante negro que no es soluble en agua. La tinción negativa
es una manera efectiva de aumentar el contraste de las células en la
microscopia óptica, pero, su mayor utilidad es la detección de cápsulas que
rodean a las células bacterianas
Procedimiento
·
Colocar una gota pequeña de solución salina
fisiológica sobre una lámina portaobjetos limpia y agregar una cantidad pequeña
de cultivo (el cultivo debe ser joven).
·
Mezclar bien.
·
Agregar una gota pequeña de tinta china.
·
Colocar un cubreobjetos de forma inmediata
(permita que la gota se extienda como una película delgada debajo).
·
Observar
con objetivo de inmersión bajando el condensador para reducir la luz.
Interpretación
Las cápsulas se pueden observar como halos claros
oponiéndose a un fondo oscuro
Bibliografía
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