Microbiología para todos.

  Ureasa La prueba de la ureasa es utilizada para determinar la capacidad de un microorganismo de producir la enzima ureasa también conocida como úrea amidohidrolasa. La misma, hidroliza la úrea con la producción de dióxido de carbono, agua y dos moléculas de amoniaco. El amoniaco reacciona en solución para formar carbonato de amonio, dando como resultado la alcalinización del medio, haciendo que el indicador de pH rojo de fenol vire a un color fucsia intenso (Castellano y col, 2012) . El ensayo de la ureasa sirve para distinguir Klebsiella (positivo) de Escherichia (negativo) y, diferenciar Proteus (positivo) de Providencia prueba negativa   (Madigan y col, 2004) . Procedimiento 1.        Inocular por estrías la superficie del bisel del tubo de ensayo utilizando un inóculo denso del microorganismo a estudiar. 2.        Incubar a 35 ° C durante 24 a 48 horas en aerobiosis. Nota: no se debe hacer punc...

  Indol La prueba de indol tiene como principio o fundamento la conversión del triptófano de las proteínas en indol, donde se realiza la detección del indol en el medio de cultivo empleando dimetil-aminobenzaldehído y su utilización más frecuente es: diferenciar microorganismos pertenecientes al género Escherichia (indol positivo) de los géneros Klebsiella y Enterobacter que son indol negativo, y distinguir entre Edwardsiella (indol positivo) de Salmonella que es indol negativo  (Madigan y col, 2004) . La prueba de indol esta fundamentada en determinar si la bacteria tiene el complejo enzimático triptofanasa con el cual degrada el triptófano para producir indol. El indol es un benzil-pirrol, generado por la degradación metabólica del aminoácido triptófano. Las bacterias poseedoras del complejo triptofanasa, tienen la capacidad de hidrolizar y desaminar el triptófano con la producción de indol, ácido pirúvico, amoniaco y energía. Esta reacción sucede con el añadido de...

  Coloración de esporas Las esporas se pueden observar de la forma más sencilla como cuerpos refringentes dentro de la célula en suspensiones bacterianas sin colorear, o como zonas incoloras que están dentro de las células bacterianas teñidas con los métodos comunes. La pared de la espora es impermeable de forma relativa, no obstante, los colorantes la pueden penetrar si la preparación es calentada. La misma impermeabilidad es útil, por tanto, para evitar la decoloración de la espora durante el paso de tratamiento con alcohol, el cual es capaz de decolorar las células vegetativas. Por último, las formas vegetativas se pueden contrastar. Las esporas por lo común se tiñen con verde de malaquita o carbolfucsina  (Brooks y col, 1999) .    La existencia de dos géneros bacterianos conocidos como Clostridium y Bacillus se caracterizan por la producción de esporas, la mismas constituyen estructuras de resistencia en las bacterias, mas no de reproducción.  Las espo...

Coloración de flagelos Los flagelos son estructuras extremadamente finas de 12 a 30 nanómetros de diámetro, para poder verse en el microscopio óptico, sin embargo, si son tratadas con una suspensión coloidal inestable compuesta por sales de ácido tánico para formar un precipitado denso en la pared celular y en los flagelos, se puede evidenciar su presencia y disposición en las células. De esta forma, el diámetro aparente de estas estructuras aumenta de tal manera que a tinción posterior con fucsina básica los hace visibles en el microscopio de luz  (Brooks y col, 1999) . Una gran cantidad de bacterias móviles poseen flagelos, la disposición de los mismos, su número y forma son claves para la diferenciación de especies, en especial, cuando las reacciones bioquímicas resultan erróneas o son débiles. La coloración de flagelos no es un proceso sencillo, los flagelos son frágiles, por lo general se desprenden de la superficie bacteriana durante el procesamiento de la muestra. Muchas cél...

Coloración de cápsula Las cápsulas son estructuras extracelulares mucilaginosas que se encuentran alrededor de algunas bacterias. La mayor cantidad de las cápsulas están conformadas por polisacáridos. De forma frecuente la producción de cápsula está relacionada con la virulencia de microorganismos causantes de enfermedad. La pérdida de la capacidad de formar una cápsula debido a una mutación está asociada con la desaparición de la virulencia y el incremento de la facilidad de destrucción por parte de los fagocitos, aunque no afecta la viabilidad. Las cápsulas pueden ser destruidas o disueltas con mucha facilidad, y son difíciles de colorear. Se usan dos métodos para poder verlas al microscopio óptico: las coloraciones de Anthony o de Hiss, que emplean cristal violeta o fucsina básica, para colorear la célula, y una sal de cobre que se deposita en el exterior de la cápsula. El otro método está basado en la utilización de una coloración negativa, por medio de la cual, las células queda...

Gránulos metacromáticos Algunas bacterias tienen la capacidad de acumular gránulos de polifosfato, los cuales son reservas de fosfato inorgánico que se pueden emplear en la síntesis de ATP (trifosfato de adenosina o adenosin trifosfato). Dichos gránulos son conocidos a veces como gránulos de volutina o gránulos metacromáticos   (Brooks y col, 1999) . Se sospecha que los polifosfatos proporcionan el fósforo y la energía que se requieren para la síntesis de los ácidos nucleicos. La volutina tiene una afinidad destacable por los colorantes básicos (azul de toluidina o azul de metileno), y de forma frecuente se presentan de con un color distinto o más intenso que el del colorante aplicado (Castellano y col, 2012) . Para teñir gránulos metacromáticos se pueden utilizar la coloración simple de azul de metileno de L öeffler o la coloración de Albert. Azul de metileno de Löeffler                 ...